Phần 4: Chiết tách - Phương pháp phân tích catechin (Nguyễn Chí Thịnh)

Joined: July 19th, 2011, 3:33 pm

August 7th, 2011, 10:18 am #1

Phần 4: CHIẾT TÁCH - PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CATECHIN
Catechin được chiết xuất từ nhiều nguồn khác nhau. Ở đây chỉ trình bày quy trình chiết tách catechin từ lá chè xanh.
4.1. Sơ đồ chiết tách catechin:
[+] Spoiler

Chạy sắc kí lỏng trung áp MPL với cột tách pha đảo RP-18 thu được EGCG, GCG, EGC, GC.
4.2. Thuyết minh quy trình:
4.2.1. Chiết và chế tạo cao chè từ lá chè:
[+] Spoiler
Lá chè (lá già, chè vụn, chè cám, cọng,...) được rửa sạch, cắt nhỏ vò nát rồi đun sôi tỉ lệ 1kg / 2 lít, duy trì nhiệt độ sôi khoảng 15 phút, rồi để nguội, sau đó gạn vắt bỏ bã, để lắng lọc lấy phần trong, thu được 1 lít dịch chiết. Với lá chè hái về mùa thu - đông, hàm lượng chất tan trung bình trong dịch chiết 9,5g/l. Dịch chiết được sử dụng với nồng độ trong dung dịch thử nghiệm tính theo khối lượng chất tan C (g/l).
Dung dịch thử nghiệm nước muối NaCl 3%. Được xác định tỷ lệ poli phenol tổng và cafein từ 3 kg nguyên liệu thực hiện quá trình tách chiết thu được 67,5 gam poliphenol tổng độ sạch 90 %. Tiếp tục phân lập các catechin bằng sắc kí cột thu được 64% các catechin thành phần ở dạng tinh khiết. Dung môi là nước, tỷ lệ 1kg nguyên liệu/10 lít nước; đun sôi với thời gian 30 phút, vắt - lọc, sau đó đem cô cạn lại tạo thành cao đặc có hàm lượng khô thu được là 67,5 gam poliphenol tổng độ sạch 90 %.
4.2.2. Tách catechin:
[+] Spoiler
Để phân lập các catechin từ poliphenol tổng dùng phương pháp sắc kí lỏng trung áp MP-LC với cột tách pha đảo RP-18 thu được bốn phân đoạn.
Sau khi xác định các đặc trưng phổ IR, phổ NMR với các kĩ thuật 1 chiều và 2 chiều, phổ DEP, phổ khối MS và so sánh với các catechin mẫu cho thấy các phân đoạn được tách ra là các catechin tinh khiết: epigalocatechingalat (EGCG), epigalocatechin (EGC) và galocatechin (GC).


R = R’ = H : Catechin
R = OH, R’ = H : Galocatechin
R =OH, R’= Galoyl: Galocatechingalat
R= R’ = H : Epicatechin
R= OH, R’ = H : Epigalocatechin
R=OH, R’= Galoyl : Epigalocatechingalat
Từ 3kg gam nguyên liệu thực hiện quá trình tách chiết thu được 67,5 gam poliphenol tổng độ sạch 90 %. Tiếp tục phân lập các catechin bằng sắc kí cột thu được 64% các catechin thành phần ở dạng tinh khiết. Các chất được tách ra kết tinh lại trong dung môi điclometan. Tuy không thu được catechin, nhưng EGCG là chất có hoạt tính sinh học cao thì lại thu được với hàm lượng rất cao. Như vậy quy trình công nghệ tách chiết catechin đã đạt được các tiêu chí cần thiết:
- Chủ động về nguyên liệu, tận thu các thứ phẩm trong sản xuất chè.
- Dung môi để chiết chỉ đơn thuần là nước nóng nên không tốn kém. Công nghệ tách không phức tạp, khá an toàn, hiệu quả tách tốt (so với tiêu chuẩn của nước ngoài) và độ an toàn tuyệt đối của dung môi.
Từ đó đã xác định phương pháp chiết tách catechin từ phụ phẩm cây chè bằng nước, chiết lại bằng etyl axetat, kết tinh lại và tách tạp chất bằng điclometan.
Nguyên liệu sử dụng là thứ phẩm của cây chè (kể cả chè vụn). Loại này có nhược điểm là hàm lượng catechin thấp hơn các loại chè thành phẩm nhưng giá thành của nó rẻ hơn từ 30 đến 40 lần.
Dung môi sử dụng là nước, etyl axetat và điclometan. Đây là các dung môi rẻ tiền và sẵn có trên thị trường.
Tiến hành chiết tách catechin từ phụ phẩm của cây chè theo phương pháp: Loại chlorophyl trước, chiết tách polyphenol sau.
4.3. Phương pháp phân tích catechin:
[+] Spoiler
Phương pháp HPLC – UV và MS được dùng để định tính và định lượng các catechins từ các cao trích lý.Kết quả cho thấy, trà xanh có hàm lượng các catechin rất lớn (GC 5,1%, EGC 10,8%, C 3,8%, EC 13% trong cao). Phổ MS còn cho thấy một phần các catechin tồn tại ở các dạng poly-catechin.
Bảng: Phân tích catechin bằng phương pháp HPLC

Hình: Kết quả chạy HPLC
Quote
Like
Share

Joined: July 17th, 2011, 2:28 pm

August 8th, 2011, 9:25 am #2

Chào nhóm! Ở sơ đồ chiết tách catechin nhóm có thể giải thích giúp mình vì sao nguyên liệu khi chiết phải thêm NaOH, khi thu được dịch chiết thì ta phải axit hóa nó? Thanks nhóm!
Quote
Like
Share

Joined: July 21st, 2011, 8:45 am

August 12th, 2011, 5:51 pm #3

Chào nhóm. Nhóm có đề cập "Tiến hành chiết tách catechin từ phụ phẩm của cây chè theo phương pháp: Loại chlorophyl trước, chiết tách polyphenol sau" nhưng trên sơ đồ chiết tách catechin mình không thấy có giai đoạn loại chlorophy. Vậy nhóm có thể cho mình biết trong quá trình chiết tách catechin từ phụ phẩm của cây chè thì loại chlorophy vào giai đoạn nào? và nhằm mục đích gì? Cám ơn nhóm nhiều
Quote
Like
Share

Joined: July 21st, 2011, 8:45 am

August 12th, 2011, 5:57 pm #4

Mình có một thắc mắc. "Phương pháp chiết tách catechin từ phụ phẩm cây chè bằng nước, sau đó chiết lại bằng etyl axetat, kết tinh lại và tách tạp chất bằng điclometan". Vậy chiết lại bằng etyl axetat, kết tinh lại và tách tạp chất bằng điclometan nhằm mục đích gì? tại sao phải làm như vậy? và lượng dung môi etyl axetat, điclometan sử dụng là bao nhiêu? chúng có gây ảnh hưởng xấu cho sản phẩm không? Thanks
Quote
Like
Share

Joined: July 19th, 2011, 3:14 am

August 17th, 2011, 2:18 am #5

dhtp6clt-trankimthuy-10309301 wrote:Chào nhóm! Ở sơ đồ chiết tách catechin nhóm có thể giải thích giúp mình vì sao nguyên liệu khi chiết phải thêm NaOH, khi thu được dịch chiết thì ta phải axit hóa nó? Thanks nhóm!
Chào bạn, mình xin trả lời câu hỏi của bạn : Nguyên liệu khi chiết ta cho Nước nóng + NaOH vào nhằm mục đích loại ra các chlorophyl tách các hợp chất pholyphenol (catechin) ra khỏi nguyên liệu một cách triệt để hơn, tăng lượng pholyphenol thu được nhiều hơn. Sau đó ta acid hóa dịch triết để xác định các hợp chất Flavanol (đặc biệt là catechin) các hợp chất này không màu, khi tác dụng với acid sẽ có màu đỏ, thuận thiện cho quá trình triết và thu nhận riêng các hợp chất catechin.
Cảm ơn câu hỏi của bạn!
Quote
Like
Share

Joined: July 19th, 2011, 3:14 am

August 17th, 2011, 2:26 am #6

dhtp6alt-vuthithuhang-10371751 wrote:Chào nhóm. Nhóm có đề cập "Tiến hành chiết tách catechin từ phụ phẩm của cây chè theo phương pháp: Loại chlorophyl trước, chiết tách polyphenol sau" nhưng trên sơ đồ chiết tách catechin mình không thấy có giai đoạn loại chlorophy. Vậy nhóm có thể cho mình biết trong quá trình chiết tách catechin từ phụ phẩm của cây chè thì loại chlorophy vào giai đoạn nào? và nhằm mục đích gì? Cám ơn nhóm nhiều
Chào bạn mình xin trả lời câu hỏi của bạn .
Trên sơ đồ tách chiết mình ko có đề cập đến phụ phẩm của cây chè, nhưng mình cũng giải thích là giai đoạn loại chlorophyl vào giai đoạn từ phụ phẩm cho ra dịch chiết, lúc này mình loại chlorophyl nhằm mục đích tách các hợp chất pholyphenol ra hỏi các chất hòa tan trong nước, tăng số lượng pholyphenol từ phụ phẩm ra nhiều hơn để thuận tiện cho quá trỉnh chiết !
Thanks bạn !
Quote
Like
Share

Joined: July 19th, 2011, 3:14 am

August 17th, 2011, 2:44 am #7

dhtp6alt-vuthithuhang-10371751 wrote:Mình có một thắc mắc. "Phương pháp chiết tách catechin từ phụ phẩm cây chè bằng nước, sau đó chiết lại bằng etyl axetat, kết tinh lại và tách tạp chất bằng điclometan". Vậy chiết lại bằng etyl axetat, kết tinh lại và tách tạp chất bằng điclometan nhằm mục đích gì? tại sao phải làm như vậy? và lượng dung môi etyl axetat, điclometan sử dụng là bao nhiêu? chúng có gây ảnh hưởng xấu cho sản phẩm không? Thanks
Mình xin trả lời câu hỏi bạn như sau:
Axetat etyl hay Etyl axetat là một hợp chất hữu cơ với công thức CH3-COO-CH2-CH3. Đây là một chất lỏng không màu có mùi dễ chịu và đặc trưng, nó thường được viết tắt là EtOAc, và được sản xuất ở quy mô khá lớn để làm dung môi.
Axetat etyl là một dung môi phân cực nhẹ, dễ bay hơi, tương đối không độc hại và không hút ẩm. Nó là chất nhận cũng như cho liên kết hiđrô yếu.
Axetat etyl được dùng rộng rãi làm dung môi cho các phản ứng hóa học cũng như để thực hiện công việc chiết các hóa chất khác. Và dĩ nhiên mục đích của nó giúp cho quá trình chiết tách dễ dàng và nhanh chóng, nếu nó không có mục đích thì đâu cần phải sử dụng đúng ko bạn!
Diclometan có tác dụng tương dương với metanol , nên mình sẽ đề cập đến metanol !Methanol là một loại cồn có công thức cấu tạo CH3OH (viết tắt MeOH), là một hợp chất hữu cơ, không màu, dễ bay hơi, dễ cháy… Methanol được sử dụng như là một dung môi dùng để tách riêng các hợp chất Flavanol
Methanol không phải là loại thực phẩm, vì vậy, việc sử dụng các loại rượu có nồng độ methanol vượt mức quy định (ngưỡng cho phép là Thanks bạn !
Quote
Like
Share

Joined: July 19th, 2011, 1:51 am

August 17th, 2011, 10:10 am #8

chào nhóm!
như các bạn đã trình bày:atechin được chiết xuất từ nhiều nguồn khác nhau.Vậy cho mình hỏi đó là những nguồn nào? quy trình sản xuất atechin từ lá chè có có khác với quy trình sản xuất atechin từ các nguồn nguyên liệu khác không?và hàm lượng atechin trong nguyên liệu nào là cao nhất?
thanks
Quote
Like
Share

Joined: July 19th, 2011, 3:33 pm

August 17th, 2011, 2:50 pm #9

dhtp6clt-ngothinhutrang-10310411 wrote:chào nhóm!
như các bạn đã trình bày:atechin được chiết xuất từ nhiều nguồn khác nhau.Vậy cho mình hỏi đó là những nguồn nào? quy trình sản xuất atechin từ lá chè có có khác với quy trình sản xuất atechin từ các nguồn nguyên liệu khác không?và hàm lượng atechin trong nguyên liệu nào là cao nhất?
thanks
Chào bạn! Mình xin thay mặt nhóm trả lời câu hỏi của bạn. Trong phần 1 mình đã có giới thiệu về hàm lượng catechin trong một số loại thực phẩm. Ngoài lá chè thì catechin còn được tìm thấy trong thực phẩm khác như rượu vang đỏ, sô cô la, dâu, táo với lượng nhỏ. Chính vì trong lá chè có chứa hàm lượng catechin lớn nên hiện nay người ta thường chiết tách catechin từ lá chè là phổ biến. Còn các nguyên liệu khác chứa hàm lượng catechin rất nhỏ, nên quá trình chiết tách rất khó khăn và việc thu nhận catechin ko được như mong muốn nên ko được áp dụng phổ biến. Cảm ơn câu hỏi của bạn!
Quote
Like
Share

Joined: August 11th, 2011, 2:02 am

August 22nd, 2011, 8:16 am #10

Theo sơ đồ chiết tách catechin có công đoạn bổ sung EtOAc, bạn cho mình hỏi EtOAc là gì?
Quote
Like
Share

Confirmation of reply: